抗体生成の最良の効果を得るために,抗原ポリペプチドを注意深く設計する必要があります.抗原が過剰な免疫反応を起こさないタンパク質に結合する抗体を生成します.
抗原性ポリペプチドの配列長さは8〜20のアミノ酸残留物でなければならない.ポリペプチドの特異性が強くないし,生成された抗体とネイティブタンパク質の結合能力が十分に強くないリスクがあります.しかし,シーケンスの長さが20を超えると,二次構造を導入することが可能になり,その結果になった抗体は特異性を失い,ペプチド鎖が長くなるほど合成が難しくなるほど複雑なペプチドの合成に長年の豊富な経験を積んでKS-V ペプチドは,効率的かつ迅速に,高純度で完成した抗原ペプチドを提供して,あなたの研究開発を支援することができます.
タンパク質のほとんどの短い線形ペプチド断片は 水溶液では構造化されていませんがいくつかの免疫原性および抗原性ペプチドが構造化された形態に対する構成特性を示していることが示されています主にNMRとCD光譜を用いて,ベータターン,螺旋形,新生螺旋形の非常に小さな集団を検出し定量化することが可能になった.最近の研究は,構造化された形態の存在が,ペプチド配列内のT細胞および/またはB細胞エピトップの位置と相関していることを示唆しています.ペプチドと抗ペプチド抗体間の複合体のX線結晶構造は,しばしばベータターン構成で結合するペプチドを示します.そして,あるペプチド-抗体複合体のヘリックスの存在は,NMRスペクトロスコピーによって示されています. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionこれらの結果は,ペプチドベースのワクチンの設計に潜在的に利用できます.
まず ペプチド抗原は 標的タンパク質のアミノ酸配列が 分かっていても タンパク質自体が 存在しない場合 抗体生成の 賢い解決策です構造的に安定し,完全なタンパク質として得られないほど複雑である (e特定のトランスメムラン受容体,イオンチャネルなど.ペプチド免疫原体アプローチは,標的タンパク質のドメインに対する抗原の選択と設計に柔軟性を与え,追加の利点としてペプチド抗原は,標的タンパク質の翻訳後修正結合部位に対する抗体を生成するのに非常に有用である.
他の利点は:
多くのペプチド配列が免疫原性であっても,すべては標的タンパク質に対する反応性を持つ抗体を生成する上で同等に有効ではありません.ペプチド抗原を用いた抗体生成の成功は,設計において考慮する必要があるいくつかの要因に依存する.含め:
標的タンパク質のアミノ酸配列の精度
完全タンパク質の予測された 2ary / 3airy構造
ペプチド抗原によって模倣されるタンパク質のドメイン/領域の選択
ペプチド抗原をより大きなキャリアタンパク質に結合させる必要性
特定のペプチド配列の合成の容易さ
したがって,ペプチド抗原の設計には以下の一般的勧告が適用されます.
正確な種とタンパク質配列が特定されていることを確認します.
溶剤で溶解できる部分から ペプチド抗原を選びますこれはタンパク質表面に露出した領域で,溶媒の水性 (水利性) 環境と接触している.タンパク質の特定の領域は,トランスメムラン領域や球状タンパク質の中心部など,抗体にはアクセスできない可能性があります.
重要な利点は,ペプチド抗原が特定のエピトープをカバーするように設計できるということです.ペプチド抗原候補は特定のタンパク質データベースに対してスクリーニングされます.特定のドメインは他のタンパク質にも存在する可能性があります.望ましくない交叉反応の可能性を最小限に抑えるため,これらの配列を避けるべきで,その結果,全抗体特異性を最適化します.最小の配列同定性を持つ配列は,望ましくない標的外タンパク質結合を減らすために最も選択されます..
無傷なタンパク質の標的ドメインの3D構造に応じて,抗原の三次構造を最適に模倣するために制限技術が必要になる可能性があります.タンパク質表面模倣の専門家として構成的に制限されたペプチド抗原の設計と合成のための様々な (部分的に独占) 技術は利用可能である.
KLH,BSA,OVAなどのキャリアタンパク質への先行結合なしには,重要な免疫反応を生むには小さすぎる.通常,ペプチド 〜 キャリアタンパク質結合剤の使用が推奨されます..
ペプチド抗原の設計では,特定のペプチド配列の合成の容易さを考慮する必要があります.水害性および水害性残留の両方を含める必要があります.免疫活性を促進するアミノ酸 (基本アミノ酸と芳香アミノ酸など) を組み込むことがペプチドに有利です溶解性を確保するために,長鎖の水害性残留物も避けられる.少なくとも1つの電荷残留物 (アルギニン)アミノ酸は5つのアミノ酸に含まれます.ペプチド溶解性は,保守的な代替物またはN-またはC端に極性残留物を追加することによっても改善することができる.抗原を設計する際には,ベータシートやアルファヘリックスなどの複雑な領域を避け,柔軟な領域を狙うのが好ましい.
KS-Vは,ペプチド抗原の合成 (必要に応じて) 構成制約,PTM,結合またはバイオチネレーションを含む最先端の能力と専門知識を適用します.ほとんどの抗体生成プロジェクトでは,どのペプチド抗原にも少なくとも85%の純度が推奨されます.タンパク質結合には通常十分で,通常,約10mgのペプチドを合成します.ELISAスクリーニングと,必要に応じてアフィニティマトリックスクロマトグラフィーの設定.
抗体生成の最良の効果を得るために,抗原ポリペプチドを注意深く設計する必要があります.抗原が過剰な免疫反応を起こさないタンパク質に結合する抗体を生成します.
抗原性ポリペプチドの配列長さは8〜20のアミノ酸残留物でなければならない.ポリペプチドの特異性が強くないし,生成された抗体とネイティブタンパク質の結合能力が十分に強くないリスクがあります.しかし,シーケンスの長さが20を超えると,二次構造を導入することが可能になり,その結果になった抗体は特異性を失い,ペプチド鎖が長くなるほど合成が難しくなるほど複雑なペプチドの合成に長年の豊富な経験を積んでKS-V ペプチドは,効率的かつ迅速に,高純度で完成した抗原ペプチドを提供して,あなたの研究開発を支援することができます.
タンパク質のほとんどの短い線形ペプチド断片は 水溶液では構造化されていませんがいくつかの免疫原性および抗原性ペプチドが構造化された形態に対する構成特性を示していることが示されています主にNMRとCD光譜を用いて,ベータターン,螺旋形,新生螺旋形の非常に小さな集団を検出し定量化することが可能になった.最近の研究は,構造化された形態の存在が,ペプチド配列内のT細胞および/またはB細胞エピトップの位置と相関していることを示唆しています.ペプチドと抗ペプチド抗体間の複合体のX線結晶構造は,しばしばベータターン構成で結合するペプチドを示します.そして,あるペプチド-抗体複合体のヘリックスの存在は,NMRスペクトロスコピーによって示されています. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionこれらの結果は,ペプチドベースのワクチンの設計に潜在的に利用できます.
まず ペプチド抗原は 標的タンパク質のアミノ酸配列が 分かっていても タンパク質自体が 存在しない場合 抗体生成の 賢い解決策です構造的に安定し,完全なタンパク質として得られないほど複雑である (e特定のトランスメムラン受容体,イオンチャネルなど.ペプチド免疫原体アプローチは,標的タンパク質のドメインに対する抗原の選択と設計に柔軟性を与え,追加の利点としてペプチド抗原は,標的タンパク質の翻訳後修正結合部位に対する抗体を生成するのに非常に有用である.
他の利点は:
多くのペプチド配列が免疫原性であっても,すべては標的タンパク質に対する反応性を持つ抗体を生成する上で同等に有効ではありません.ペプチド抗原を用いた抗体生成の成功は,設計において考慮する必要があるいくつかの要因に依存する.含め:
標的タンパク質のアミノ酸配列の精度
完全タンパク質の予測された 2ary / 3airy構造
ペプチド抗原によって模倣されるタンパク質のドメイン/領域の選択
ペプチド抗原をより大きなキャリアタンパク質に結合させる必要性
特定のペプチド配列の合成の容易さ
したがって,ペプチド抗原の設計には以下の一般的勧告が適用されます.
正確な種とタンパク質配列が特定されていることを確認します.
溶剤で溶解できる部分から ペプチド抗原を選びますこれはタンパク質表面に露出した領域で,溶媒の水性 (水利性) 環境と接触している.タンパク質の特定の領域は,トランスメムラン領域や球状タンパク質の中心部など,抗体にはアクセスできない可能性があります.
重要な利点は,ペプチド抗原が特定のエピトープをカバーするように設計できるということです.ペプチド抗原候補は特定のタンパク質データベースに対してスクリーニングされます.特定のドメインは他のタンパク質にも存在する可能性があります.望ましくない交叉反応の可能性を最小限に抑えるため,これらの配列を避けるべきで,その結果,全抗体特異性を最適化します.最小の配列同定性を持つ配列は,望ましくない標的外タンパク質結合を減らすために最も選択されます..
無傷なタンパク質の標的ドメインの3D構造に応じて,抗原の三次構造を最適に模倣するために制限技術が必要になる可能性があります.タンパク質表面模倣の専門家として構成的に制限されたペプチド抗原の設計と合成のための様々な (部分的に独占) 技術は利用可能である.
KLH,BSA,OVAなどのキャリアタンパク質への先行結合なしには,重要な免疫反応を生むには小さすぎる.通常,ペプチド 〜 キャリアタンパク質結合剤の使用が推奨されます..
ペプチド抗原の設計では,特定のペプチド配列の合成の容易さを考慮する必要があります.水害性および水害性残留の両方を含める必要があります.免疫活性を促進するアミノ酸 (基本アミノ酸と芳香アミノ酸など) を組み込むことがペプチドに有利です溶解性を確保するために,長鎖の水害性残留物も避けられる.少なくとも1つの電荷残留物 (アルギニン)アミノ酸は5つのアミノ酸に含まれます.ペプチド溶解性は,保守的な代替物またはN-またはC端に極性残留物を追加することによっても改善することができる.抗原を設計する際には,ベータシートやアルファヘリックスなどの複雑な領域を避け,柔軟な領域を狙うのが好ましい.
KS-Vは,ペプチド抗原の合成 (必要に応じて) 構成制約,PTM,結合またはバイオチネレーションを含む最先端の能力と専門知識を適用します.ほとんどの抗体生成プロジェクトでは,どのペプチド抗原にも少なくとも85%の純度が推奨されます.タンパク質結合には通常十分で,通常,約10mgのペプチドを合成します.ELISAスクリーニングと,必要に応じてアフィニティマトリックスクロマトグラフィーの設定.
