記述:

ペプチドマッピングを用いて,タンパク質または抗体の主要構造に微妙な変化が起き,タンパク質の活性や結合親和性に影響を与える可能性があることが確認できます.LC-MS/MSによるペプチドマッピングは,タンパク質や抗体の原始配列を確認するための最も強力な定性アッセイの一つです.このサービスは,同じタンパク質,抗体,またはバイオシミラルの異なるロットを比較するために使用できます.

LC-MS/MSによるペプチドマッピング分析サービス その中には:

• 興味のある抗体/タンパク質は,LysCやトリプシンなどのタンパク質分解酵素で変性化,減少,消化されます.
• 選択:タンパク質の配列カバーを増加させるため,第二のタンパク質分解酵素を使用します.
• 結果となるペプチド混合物は,逆相HPLCで分離される.UV吸収性の染色体は,UV214nmで生成される.
• HPLC分離後,高解像度の質量スペクトロメトリ (Thermo Fisher Orbitrap VelosまたはFusion) でさらなる分析を行います.
• タンパク質のペプチドマップは,基準タンパク質との比較のために生成される.
• ピークは原始配列に 解析されます
• 選択可能 (2つのサンプル以上): タンパク質の各ロット間の変化を評価したり,バイオシミラーを比較したりするために,比較性評価が行われます.

届けられる情報:

• 主要配列の確認 (配列カバー: 一つの酵素を用いて60~90%,2つ以上の酵素を用いて>98%).
• N結合オリゴサカリドのグリコプロファイリング (グリコフォームの異質性と部位占有の近似)
• PTM の特定と近似量化,例えばデアミダ化,酸化,N期ピログルタマート形成とC期ライス処理 (アミノ酸の変異位置と%変異が検出可能).
• 異なるプロット間の類似性の評価
• バイオシミラルの比較性評価

試料処理:デナチュレーション,還元/アルキレーション,酵素分解,その後LC-MSまたはLC-MS/MS.